3.3. Работа с микроскопом
3.3.1. Общие правила работы с микроскопом
Место для микроскопа выбирают подальше от прямого солнечного света. Работа на столе с темной поверхностью меньше утомляет глаза. Лучше смотреть в окуляр левым глазом, не закрывая правого. При работе с бинокулярной насадкой сначала регулируют расстояние между окулярами в соответствии с расстоянием между глазами наблюдателя так, чтобы поля зрения обоих окуляров сливались в одно.
Переносят микроскоп, держа одной рукой за штатив, другой – за ос- нование микроскопа. Следует предохранять микроскоп от толчков, сопри- косновения с сильнодействующими веществами типа кислот, щелочей. Не рекомендуется вынимать окуляр из трубы, чтобы не загрязнять пылью трубу и объективы. Во время работы желательно защищать микроскоп от дыхания, так как конденсация паров ведет к его порче.
Линзы должны быть всегда чистыми. Микроскоп следует хранить в чех- ле. Нельзя касаться пальцами оптических поверхностей (Теппер и др., 1993).
3.3.2. Установка освещения
Удобнее пользоваться искусственным источником света – он более постоянен, чем дневной, лучше освещает объект, что важно при работе с сильными объективами (90?). Наиболее известен метод освещения препа- рата по Келеру. Рациональное освещение объекта достигается при исполь- зовании осветителей типа ОК-7, ОИ-9 и ОИ-19. Осветитель с низковольт- ной лампой устанавливают на расстоянии 25...30см от микроскопа при по- мощи соединительной планки (крестовины). Полевая диафрагма осветите- ля открыта; используют объектив 8?, зеркало с плоской поверхностью; конденсор поднят.
Препарат в поле зрения микроскопа фокусируют при открытых диа- фрагмах осветителя и конденсора. Из осветителя удаляют матовое стекло. Полевую диафрагму осветителя закрывают. На зеркало помещают белый лист бумаги для получения четкого изображения нити лампы осветителя.
Движением зеркала перемещают световой поток в поле зрения мик- роскопа. Фокусируют препарат. Опускают конденсор до тех пор, пока изо- бражение (проекция) краев полевой диафрагмы осветителя в плоскости препарата не станет четким. Центрируют легкими движениями зеркала изображение отверстия диафрагмы. Наблюдая в микроскоп, постепенно открывают полевую диафрагму осветителя так, чтобы освещенный круг ее заполнил все поле зрения микроскопа; лучше, если он немного выйдет за пределы поля зрения.
Положение осветителя, зеркала, конденсора микроскопа в даль- нейшем не должно изменяться! Порядок установки света по Келеру реко- мендуют также и при темнопольной и фазово-контрастной микроскопии (Теппер и др., 1993).
3.3.3. Настройка микроскопа для работы при малом увеличении
Исследуемый объект на предметном столике микроскопа должен быть освещен. Для этого пользуются специальным осветителем, светом из окна или от настольной лампы. В двух последних случаях используют во- гнутую поверхность находящегося под предметным столиком зеркала. С помощью зеркала свет направляют через отверстие в предметном столике. Если имеется подходящий конденсор, то для направления света через него используют плоскую поверхность зеркала.
С помощью винта грубой настройки поднимают вверх тубус микро- скопа и поворачивают револьверную головку до тех пор, пока объектив с малым увеличением (?10 или 16мм) не попадет в паз тубуса (при этом раз- дается щелчок).
Исследуемый препарат помещают на предметный столик микроско- па таким образом, чтобы находящийся под покровным стеклом материал находился над серединой отверстия в предметном столике.
Глядя на предметный столик и препарат сбоку, надо опустить ту- бус с помощью винта грубой настройки до тех пор, пока объектив с ма- лым увеличением не окажется примерно в 5мм от препарата. Далее, глядя в окуляр микроскопа и медленно поворачивая винт грубой на- стройки, необходимо добиться попадания объекта исследования в фо- кус конденсора (Теппер и др., 1993).
3.3.4. Настройка микроскопа для работы при большом увеличении
При работе с объективом большого увеличения для создания дос- таточного освещения необходим искусственный свет. Для этого исполь- зуют настольную лампу или специальный осветитель для микроскопа с матовой лампочкой. При работе с лампой накаливания необходимо меж- ду ней и микроскопом поместить лист бумаги, повернуть зеркало пло- ской поверхностью вверх так, чтобы свет, отражаясь, попадал в микро- скоп, затем сфокусировать конденсор, не убирая препарата с предметно- го столика. Поднять конденсор на расстояние 5мм от предметного сто- лика. Глядя в микроскоп, нужно поворачивать винт грубой настройки до тех пор, пока объект не попадет в фокус, а изображение лампы не нало- жится точно на препарат. Поместите конденсор несколько вне фокуса так, чтобы изображение лампы исчезло. Теперь освещение должно быть оптимальным. В конденсор вмонтирована диафрагма. Ею регулируют величину отверстия, через которое проходит свет. Это отверстие должно быть открыто как можно шире. Таким образом достигается максималь- ная четкость изображения.
Револьверную головку необходимо поворачивать до тех пор, пока объектив большого увеличения (40? или 4мм) не попадет в паз. Если на малом увеличении фокус уже был установлен, то при повороте револьвер- ной головки объектив большого увеличения автоматически установится приблизительно в фокусе. Фокусирование производиться движением объ- ектива вверх с помощью винта тонкой настройки.
Если при движении объектива с линзами большого увеличения фо- кус не устанавливается, то глядя на предметный столик сбоку, следует опустить тубус микроскопа до тех пор, пока линза почти не коснется пре- парата. Глядя в микроскоп и поворачивая винт тонкой настройки, нужно медленно поднимать объектив до тех пор, пока изображение не попадет в фокус (Теппер и др., 1993).
3.3.5. Работа с иммерсионной системой микроскопа
Для того чтобы получить более сильное увеличение, чем при работе с обычным объективом большого увеличения, необходимо использовать масля- но-иммерсионную линзу. Способность линзы собирать свет в значительной степени усиливается, если между линзой объектива и покровным стеклом по- местить жидкость. Жидкость должна иметь тот же показатель преломления, что и сама линза. Поэтому в качестве жидкости обычно используют кедровое масло. При работе с иммерсионным объективом (V = 90?; А = 1,25) устанав- ливают зеркало плоской стороной и поднимают конденсор.
Далее необходимо положить препарат на предметный столик и сфо- кусировать изображение так же, как при работе с обычным большим уве- личением. Вместо объектива с линзой большого увеличения установить объектив с масляно-иммерсионной линзой.
Каплю кедрового масла необходимо поместить на покровное стекло непосредственно над исследуемым объектом. Снова сфокусировать изо- бражение теперь уже под малым увеличением, затем поворотом револь- верной головки установить объектив с масляно-иммерсионной линзой так, чтобы его кончик касался капли масла.
Глядя в микроскоп, очень осторожно сфокусировать линзу с помо- щью винта тонкой настройки. Фокусная плоскость линзы должна нахо- диться всего в 1мм от поверхности покровного стекла.
Закончив работу, необходимо удалить с линзы масло мягкой тряпочкой, смоченной очищенным бензином.
Иммерсионную жидкость хранят в специальных двухкамерных мас- ленках. В наружную камеру наливают ксилол или очищенный бензин для очистки объективов от масла, во внутреннюю – кедровое масло. Камеру с маслом герметично закрывают пробкой, в которую вставляют стеклянную палочку для нанесения капли масла на препарат (Теппер и др., 1993).
