4.2. Процедура предварительной стерилизации

4.2.1. Стерилизация новой посуды

Новая стеклянная и пластиковая посуда, исключая готовые к исполь- зованию стерильные продукты, должна быть стерилизована перед первым использованием. Процедура состоит из погружения посуды в раствор со- ляной кислоты (обычно концентрацией 1моль) на 1 неделю, с последую- щим многократным ополаскиванием проточной водой и непосредственно перед высушиванием – дистиллированной водой. Существует и менее строгий метод, представляющий собой промывание новой стеклянной и пластиковой посуды нейтральным детергентом для лабораторного исполь- зования с последующим промыванием и высушиванием.

Существует несколько видов пробок для сосудов: устойчивые к на- греванию пластиковые, металлические и закручивающиеся силиконовые пробки (рис. 3). Перед первым использованием необходимо проверить це- лостность материалов пробок, потому что некоторые материалы (напри- мер, новые полиэтиленовые пробки) могут выделять токсичные вещества во время автоклавирования (Kawachi, Noel, 2005).

4.2.2. Стерилизация грязной посуды

Стандартные методы очистки состоят из погружения сосудов на не- сколько часов в емкость с нейтральным детергентом, очистки сосудов щеткой или губкой. Затем сосуды несколько раз ополаскиваются водопро- водной водой. Ополаскивать посуду нужно до тех пор, пока не будет пол- ной уверенности в том, что все детергенты удалены (хороший результат достигается при ополаскивании более чем 10 раз). Последний раз посуду нужно ополоснуть дистиллированной водой и высушить в месте, защи- щенном от пыли.

Другая стеклянная посуда, такая как чашки Петри, часовые стекла, предметные стекла также должны быть очищены с помощью процедуры, описанной выше. Если клетки водорослей сильно прикрепились к внут- ренней стороне сосуда, перед процедурой очистки посуду необходимо по- грузить в горячую воду на несколько часов. Для очистки закручивающихся пробок для пробирок и колб используют детергент (с последующей очист- кой с помощью щетки при необходимости), затем ополаскивают и промы- вают так, как описано выше.

46

Рис. 3. Колбы Эрленмейера с силиконовыми пробками. Слева - по- крытые алюминиевой фольгой; в центре - стандартная силиконовая проб- ка; справа - силиконовая пробка с дополнительным щитом поверх пробки (Kawachi, Noel, 2005)

Посуда, неоднократно используемая для культивирования водорос- лей, должна быть автоклавирована для того, чтобы уничтожить все споры и клетки, так как живые клетки, особенно цисты, могут загрязнить среду, если их не уничтожить полностью. После процедуры посуду следует охла- дить, очистить и ополоснуть водой (Kawachi, Noel, 2005).

4.2.3. Стерилизация стеклянных пипеток

Стеклянные пипетки, используемые для пересадки клеток, необходи- мо немедленно сполоснуть проточной водой после использования для то- го, чтобы клетки водорослей не присохли к стеклянной поверхности. Если пипетки закрыты специальными ватными пробками, их нужно удалить. Если нет возможности сполоснуть пипетку сразу после использования, ее нужно поместить в пластиковый цилиндрический контейнер с водой и ополоснуть позже.

Для очистки пипетку необходимо поместить в контейнер с детерген- том на 1 или 2 дня. Для полного промывания пипетки можно использовать специальную сверхзвуковую ванну и пипетку с эффектом сифона. Затем пипетки промывают дистиллированной водой и высушивают в сухожаро- вом шкафу при 150 ?C. После этого в кончики пипеток вставляют ватные пробки, прокаливают кончики пробок в пламени для удаления волокон ва- ты, пипетки помещают в металлический контейнер и автоклавируют или стерилизуют с помощью сухого жара (Kawachi, Noel, 2005).