4.3. Стерилизация питательных сред
4.3.1. Стерилизация маточных растворов
В большинстве случаев, каждый компонент среды готовится в сосу- дах, которые можно автоклавировать. Для стерилизации каждый раствор следует автоклавировать или стерилизовать фильтрацией и хранить при температуре 4 ?C. Витамины нужно хранить при температуре – 20 ?C. Для поддержания чистоты маточных растворов при работе с ними следует со- блюдать правила стерильности. Если в растворах наблюдаются признаки бактериального или грибного загрязнения, их нужно подвергнуть стерили- зации и содержимое вылить (Kawachi, Noel, 2005).
4.3.2. Стерилизация жидких питательных сред
Стерилизацию жидких питательных сред обычно проводят методом автоклавирования (при температуре 121 ?C в течение 20 минут). При стери- лизации питательной среды особое внимание следует уделять ее состоя- нию. Если она изменяет свой цвет или наблюдается образование осадка, то эта среда становится непригодной для использования. Среда может изме- ниться из-за множества причин, поэтому ее состояние нужно проверять на каждом этапе приготовления. Нестойкие к температуре компоненты, такие, как витамины, можно добавить после завершения процедуры, используя метод стерилизации. Тиндаллизация используется вместо автоклавирова- ния, когда следует избегать разложения чувствительных к нагреванию компонентов.
Для стерилизации питательных сред можно также использовать и микроволновую печь. При этом методе стерилизации можно достичь мак- симальной температуры не менее 84 ?C (Keller et al., 1988; Hoff, Snell, 2001). Это позволяет добавлять не стойкие к нагреванию компоненты пе- ред стерилизацией. Однако витамины лучше добавлять уже после стерили- зации. Стерилизация в микроволновой печи занимает мало времени (10 минут или менее), и это позволяет избежать как загрязнения тяжелыми ме- таллами, так и осаждения карбонатов. Однако этот вид стерилизации мож- но использовать только для очень небольших объемов жидкостей (?1- 1,5л), принимая во внимание то, что автоклавирование позволяет стерили- зовать большие объемы жидкостей (например, 20л) (Kawachi, Noel, 2005).
4.3.3. Стерилизация агаровых питательных сред
Как и для жидких сред, для стерилизации агаровых сред обычно ис- пользуют автоклавирование (при температуре 121 ?С в течение 20 минут). При использовании пробирок или чашек Петри агар распределяется соот- ветственно в стерильную пробирку или чашку Петри в стерильных усло виях и затем охлаждается. Для уменьшения загрязнения объем агара не должен превышать половины объема пробирки или чашки Петри.
Для агаровых культур, содержащих не стойкие к нагреванию компо- ненты, чувствительные компоненты следует добавлять асептически после автоклавирования, но перед застыванием агара (приблизительно при тем- пературе 50-60 ?С, для агара со стандартной температурой застывания) (Kawachi, Noel, 2005).
