4.7. Оценка стерильности
Несмотря на соблюдение правил стерильности, не всегда удается избежать загрязнения. Поэтому полезно использовать тесты на сте- рильность для оценки условий. Бактерии и грибы растут на различных питательных агарах и бульонах, хотя необходимо отметить, что не все бактерии или грибы растут на любых специфических органических средах. Для проведения общего теста на стерильность можно использо- вать 0,1% пептонный агар. Для достижения лучшего результата пептон следует растворить в питательной среде перед добавлением дистилли- рованной воды. С целью выявления грибного загрязнения лучше под- ходит экстракт солода, так как на нем грибы растут лучше, чем на пеп- тоне. Для специфических нужд, например, для метиламинотрофных бактерий, предпочтительным субстратом является метиламин.
Во время проведения теста для оценки воздушного загрязнения рабочего места серию питательных сред выставляют на открытый воз- дух на определенное время. Например, чашки Петри со стерильным пептонным агаром могут быть выставлены на 1, 5, 15, 30 и 60 минут. Сначала чашки Петри открывают на время (например, на 1 минуту) и потом закрывают. Затем чашки инкубируют в течение 1-3 дней, потом подсчитывают число колоний бактерий или грибов. Ламинарный бокс с вентиляцией можно считать стерильным, если на чашке Петри, откры- той в нем в течение 1 часа, не обнаруживается никаких разрастаний. Для бокса, стоящего в маленькой комнате, при 15-30-минутной экспо- зиции в чашке допускается появление 1-2 колоний. Если после кратко- временного открывания чашки на поверхности среды появляется мно- гочисленные колонии, то окружающая среда является очень загрязнен- ной, а процедуры стерилизации – неудачными. Таким же образом мож- но проводить тест на загрязненность с использованием пробирок с бульоном. Однако при этом невозможно подсчитать число колоний, по- этому при появлении признаков бактериального или грибного роста пробирка считается загрязненной. Если при экспозиции 10 пробирок в течение тех же интервалов времени, которые используются при оценке загрязненности с помощью агаровых чашек, ни в одной из 10 пробирок не наблюдается следов загрязнения, то среда считается стерильной. Ес- ли с момента проведения теста на загрязнение и началом работы усло- вия среды изменяются, то невозможно гарантировать стерильность ра-
бочего места. Можно привести примеры, когда стерильность среды может измениться. Если тест на загрязнение проводился в условиях по- левой станции одним человеком, а посев проводился в лаборатории, где присутствовало несколько человек, дополнительная активность может увеличить загрязненность. Загрязнение рабочего места может также увеличиться, если перед посевом проводили уборку помещения с по- мощью пылесоса, что способствует распространению спор в воздухе.
Существуют многочисленные вариации тестов на загрязненность в зависимости от среды, витаминов, маточных растворов, пипеток и т.д. Например, если с маточными растворами проводят многочислен- ные манипуляции при приготовлении, это может способствовать за- грязнению среды. Стерильность маточных растворов можно проверить в продуваемом ламинарном боксе. Если среда окажется загрязненной, то ее следует вылить. В тех случаях, когда при приготовлении среды используется метод фильтрации, эту среду необходимо протестиро- вать на загрязненность, чтобы проверить эффективность фильтрации. Позитивный бактериальный рост является свидетельством того, что бактерии прошли через фильтр.
Эти простые тесты с бесконечным числом модификаций могут использоваться для оценки стерильности. Если планируется работа с водорослями после проведения теста, необходимо соблюдать те же условия стерильности, что и во время проведения теста. Тесты не должны рассматриваться как абсолютные показатели стерильности, но они отражают состояние окружающей среды при отсутствии других возможностей оценки.
Следует отметить, что методики стерилизации могут зависеть от лаборатории и каждого исследователя. Однако вне зависимости от ис- пользуемой методики необходимо строго соблюдать требования сте- рильности, без которых невозможно культивирование водорослей (Kawachi, Noel, 2005).
Контрольные вопросы 1. Что означает термин «стерилизация»? 2. Какие способы стерилизации вам известны? 3. В чем отличие автоклавирования от других способов стерилизации? 4. В каких случаях применяется стерилизация фильтрацией? 5. Чем отличаются между собой пастеризация и тиндализация? 6. Какое оборудование необходимо для обеспечения стерильности пересева? 7. Укажите основные этапы пересева водорослей в жидкую и на агаризованную среду. 8. Как оценить степень стерильности рабочего места?
