Гематологическое исследование.
По изменениям, происходящим в крови, можно судить о патологических процессах, протекающих в организме рыб. Результаты исследований крови с учетом клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных позволяют уточнить диагноз болезни (табл. 12, 13, 14, 15).
| Показатель | Низкие значения | Высокие значения |
|---|---|---|
| Эритроцыты | Анемия, гемолиз, нарушение осморегуляции, ровреждение жабр | Стрессовая пилицитамия, дегидрадация, сгущение крови. |
| лейкоциты | Стрессовая лейкоперия | Лейкоцитоз - реакция на бактериальную инфекцию |
| Тромбоциты | Слабая свертываемость крови | Тромбоцитоз из-за хронического стресса |
| Хлориды | Нарушение осморегуляции | Сгущение крови |
| Холестерин | Нарушение жирового обмена | Хронический стресс, жировая перегрузка при кормлении |
| Время свертывания крови | Острый стресс, тромбоцитопения | Воздействие антибиотиков или сульфамидов |
| Глюкоза | Крайнее истощение | Острый или хронический стресс |
| гликоген | Хронический стресс, истощение | Несбалансированная диета, повреждение печени |
| Гематокрит | Анемия, гемолиз, повреждение жабр | Сгущение крови, стресс, полицитемия |
| Гемоглобин | Анемия, гемолиз, повреждение жабр | Сгущение крови, стресс, полицитемия |
| Метгемоглобин | Норма | Воздейтвие нитритов и некоторых других токсикантов, пересыщение воды кислородом |
| Белок | Истощение, инфекционные болезни, повреждение почек, неправильное кормление | Сгущение крови, нарушение водного баланса, гемолиз, интенсивный рост гонад |
| Рыба | Масса, г | Гематокрит, % | Гемоглобин, г% | Эритроциты млн/мкл | Примечание |
|---|---|---|---|---|---|
| Щука | - | 24-44 | - | 1-2 | Озеро, разновыростные группы |
| Белый толстолобик | 16,0 | 43 | 11,4 | 2,2 | Пруд, весна - лето |
| Белый толстолобик | 140 | 42 | 11 | 2,1 | Пруд, осень |
| Пестрый толстолобик | - | 30-37 | 7,5-8,5 | 1,14-2,0 | Корм - сухие сине-зеленые + комбикорм |
| Белый амур | 27 | 32 | 8,6 | 1,8 | Пруд, весна |
| 320 | 34 | 9,6 | 1,9 | Пруд, осень | |
| Карп | 17 | - | 8,9 | 1,8 | Лето, естественные условия |
| Карп | 10-22 | - | 7,5-8,8 | 1,4-1,7 | Зимовка, ноябрь - декабрь |
| Карп | 10-22 | - | 8,2-8,7 | 1,3-1,6 | Зимовка, февраль - март |
| Карп | 200-350 | - | 8,6-9,9 | 1,4-1,7 | Лето, июнь - июль |
| Карп | 400-500 | 38 | 8,6-10,4 | 1,14-1,44 | Осень |
| Рыба | Возраст | Количество лейкоцитов | Примечание |
|---|---|---|---|
| Лещ | - | 45-120 | Сезонные колебания |
| Угорь | - | 90 | - |
| Щука | - | 28-110 | Сезонные колебания |
| Судак | - | 35-95 | Сезонные колебания |
| Голавль | - | 40 | Сезонные колебания |
| Карась | - | 51 | - |
| Линь | - | 52 | - |
| Карп | 0+ | 14-17 | Пруд |
| Карп, 20-26 г | - | 9-23 | Пруд |
| Карп, 300-700 г | - | 22-23 | Пруд |
| Карп, 1400 г | - | 43-59 | Пруд |
| Карп | - | 23 | Самец-производитель |
| Карп | - | 16 | Самка-производитель |
| Белый толстолоб | 1+ | 98±14 | Пруд |
| Пестрый толстолобик | 1+ | 62±8 | Пруд |
| Радужная форель | - | 34 | Пруд |
| Ручьевая форель | - | 26 | Пруд |
| Показатели | Белуга | Стерлядь | Осетр | Севрюга | Лосось | Форель | Щука | Линь | Лещ | Карась | Сазан | Окунь | Сом |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Эритроциты, млн/мкл | 0,8 | 1,5 | 0,8 | 1,6 | 1,3 | 1,2 | 1,4 | 1,8 | 1,7 | 1,6 | 2,6 | 1,5 | 1,4 |
| Гемоглобин, г% | 8,7 | 10,3 | 11,5 | 11,3 | 9,8 | 10,0 | 7,9 | 8,9 | 9,6 | 8,9 | 9,7 | 9,1 | 7,0 |
| Гематокрит, % | 36,0 | 43,0 | 47,0 | 40,0 | 36,0 | 30,0 | 20,0 | 22,0 | 24,0 | 23,0 | 27,0 | 29,0 | 20,0 |
| Общее количество крови к массе тела, % | 2,8 | 3,2 | 2,5 | 3,0 | 2,3 | 2,4 | 2,0 | 1,9 | 3,9 | 4,2 | 2,5 | 1,2 | 1,6 |
| Количество лейкоцитов, тыс/мкл | - | - | - | 40,4 | 32,0 | 25,5 | 37,5 | 52,0 | 49,0 | 51,0 | 43,0 | 40,0 | 38,0 |
| Лейкоцитарная формула, % | |||||||||||||
| эозинофилы | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| нейтрофилы | - | - | - | - | 12,0 | 18,0 | 9,0 | 4,0 | 18,0 | 15,0 | 6,0 | 9,0 | 11,0 |
| полиморфоядные | - | - | - | - | 15,0 | 2,0 | 4,0 | 1,0 | 2,0 | 6,0 | 3,0 | 4,0 | 2,0 |
| лимфоцыты | - | - | - | - | 71,0 | 64,0 | 84,0 | 93,0 | 77,0 | 76,0 | 88,0 | 85,0 | 76,0 |
| моноциты | - | - | - | - | 2,0 | 16,0 | 3,0 | 2,0 | 3,0 | 3,0 | 3,0 | 2,0 | 1,0 |
| Белок общий, % | - | - | 5,1 | 5,9 | 6,3 | 5,8 | 6,7 | 3,6 | 4,7 | 5,1 | 7,1 | 8,5 | 6,8 |
Кровь для исследования берут пастеровской пипеткой из сосудов гемального канала хвостового стебля. Место взятия обрабатывают 70%-ным спиртом, просушивают ватным тампоном.
Определение количества эритроцитов и лейкоцитов. Кровь набирают в смеситель меланжера, используемого для подсчета эритроцитов млекопитающих, до метки 0,5 или 1 и насасывают жидкость для окрашивания и разведения крови до метки 101 (раствор А: нейтральрот - 25 мг; натрий хлористый - 0,6 г, вода дистиллированная-100 мл; раствор Б: кристаллвиолет - 12 мг, натрий лимоннокислый - 3,8 мг, формалин - 0,4 мл, вода дистиллированная - 100 мл). Раствор А набирают до половины расширения смесителя, раствор Б - до метки 101. (Готовят эти растворы непосредственно перед исследованием, хранить можно в холодильнике не более недели.) Под действием растворов ядра лейкоцитов окрашиваются в фиолетово-красный цвет, а цитоплазма - в розовый. В эритроцитах ядра окрашиваются в синий цвет.
После наполнения снимают резиновую трубку со смесителя, захватывают его между большим и средним пальцами и сильно встряхивают 2-5 мин, после чего выпускают из капилляра 3 капли жидкости, а 4-й каплей заряжают счетную камеру.
Принцип метода сводится к подсчету форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов) в камере Горяева. Сначала под малым увеличением микроскопа находят сетку и устанавливают равномерность распределения клеток, а затем подсчитывают их. Эритроциты считают в 5 квадратах (80 малых), расположенных по диагонали камеры Горяева. В каждом малом квадрате учитывают эритроциты, находящиеся внутри него, и те, которые касаются или лежат на его верхней и левой линиях.
Количество эритроцитов определяют по формуле
где m - общее количество клеток в 80 квадратах; γ - степень разведения крови; Х - число эритроцитов в 1 мкл.
Лейкоциты подсчитывают в 25 больших квадратах, разделенных на малые (400 малых), и определяют по формуле
X=(m*4000*y)/400
где m - общее количество лейкоцитов; γ - степень разведения крови; Х - число лейкоцитов в 1 мкл; 400 - число просмотренных малых квадратов.
Выведение лейкоцитарной формулы. У рыб различают следующие виды лейкоцитов: лимфоциты, моноциты, базофилы, нейтрофилы, эозинофилы (цв. табл. II). Некоторые авторы выделяют группу полиморфноядерных лейкоцитов.
Лимфоциты - небольшие клетки, немного меньше эритроцитов. Почти вся клетка заполнена ядром, цитоплазма видна в виде узкого ободка вокруг ядра. По Романовскому ядро окрашивается в фиолетово-розоватый цвет, цитоплазма - в голубоватый.
Моноциты - самые крупные клетки, ядро бобовидное, расположено эксцентрично, цитоплазма вакуолизирована, зернистость отсутствует.
Нейтрофилы - круглые клетки, имеют овальное, палочковидное или сегментированное ядро, расположенное у края клетки. В зависимости от возраста и формы ядра клетки разделяют на миелоциты, юные, палочкоядерные и сегментоядерные. Зернистость в цитоплазме окрашивается по Романовскому - Гимзе в фиолетово-розовый цвет.
Эозинофилы - по морфологии сходны с нейтрофилами. В цитоплазме находятся крупные многочисленные зернышки розового цвета.
Базофилы отличаются наличием в цитоплазме зерен фиолетового цвета.
Высушенный и фиксированный метанолом или спирт-эфиром (1:1) мазок крови окрашивают краской Романовского - Гимза. Раствор краски предварительно разводят нейтральной дистиллированной водой (1-2 капли на 1 мл воды). Разведенную краску подслаивают под предметное стекло, положенное мазком вниз, или красят мазки в контейнерах. В зависимости от температуры воздуха и качества краски мазок окрашивают 30-60 мин. После окраски препарат быстро ополаскивают водой, высушивают на воздухе, просматривают под микроскопом с иммерсионным объективом. Обычно просчитывают 200 лейкоцитов общепринятым методом.
Определение содержания гемоглобина.
Метод Сали. В градуированную пробирку гемометра Сали до метки 2 пипеткой наливают децинормальный раствор соляной кислоты. Капиллярной пипеткой набирают кровь до метки 20 мкл и вносят в пробирку с соляной кислотой. Затем перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 5 мин. После чего в пробирку по каплям доливают дистиллированную воду, перемешивают и подбирают цвет рабочего раствора до совпадения с цветом жидкости в стандартных пробирках.
Количество гемоглобина крови отсчитывают по нижнему мениску на градуированной пробирке. Выражают в г%.
Фотометрический метод. Мерной пипеткой в пробирку осторожно наливают 5 мл трансформирующего раствора (бикарбонат натрия - 1 г, красная кровяная соль - 0,2, цианистый калий или натрий - 0,05 г, дистиллированная вода - до 1 л). Пипеткой от гемометра Сали добавляют 20 мкл крови, промывая ее раствором путем попеременного вдувания и выдувания. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют на 20 мин в холодильнике. Затем раствор из пробирки наливают в кюветы ФЭК и, используя зеленый светофильтр, проводят измерения. Расчет гемоглобина (г/л) производят по формуле Х=D540 ·367,1 г/л, где D540 - показания ФЭК; 367,1 - коэффициент перерасчета.
