Определение метацеркариев в рыбах.
Для исследования отбирают из водоема по 10-15 экз. живых или свежих рыб каждого вида. Регистрируют дату, вид рыбы, название водоема. Проводят наружный осмотр чешуи, кожи, плавников, жабр. С этих участков делают соскобы и компрессорным методом просматривают их под микроскопом. Ножницами разрезают брюшко от анального отверстия до области сердца. С помощью лупы рассматривают сердце, гонады, печень, селезенку, почки, кишечник, серозные покровы, плавательный пузырь. Каждый орган отдельно помещают в чашку Петри или на часовое стекло. С каждого органа берут ножницами небольшие кусочки (3-5 мм), помещают на предметные стекла, просматривают под микроскопом на наличие личинок трематод и устанавливают вид метацеркариев.
Исследуют мускулатуру рыб, для чего скальпелем разрезают кожу, начиная от головы, и берут кусочки с поверхностных участков мышц и соскобы с кожи (личинки обычно локализуются в мышечной ткани на глубине 2,5- 3 мм). Кусочки мышц помещают на предметные стекла или компрессорий и просматривают под микроскопом.
В мускулатуре рыб паразитируют метацеркарии трематод патогенные и непатогенные для человека и животных. Патогенные для человека и животных метацеркарии (описторхисы, меторхисы, клонорхисы, псевдамфистомы) находятся в цистах, характерно наличие у них двух присосок и черного экскреторного пузыря овальной или грушевидной формы, занимающего 1/3 или 1/4 тела личинки. В цистах личинки активно подвижны. Непатогенные метацеркарии - личинки из рода буцефал и рипидокотил. У них имеется одна крупная присоска с пальцеобразными выступами, экскреторный пузырь зигзагообразной формы занимает до 2/3 тела, они слабоподвижны в цистах. Для метацеркариев параценогонимусов характерна более черная экскреторная система с тремя белыми щелевидными просветами.
Для определения жизнеспособности личинок трематод извлекают из органов и тканей рыб, помещают в подогретый до 40°С физиологический раствор, в искусственный желудочный сок (100 мл 0,5%-ного раствора NaCl, 0,5 г пепсина, 0,75 мл 35%-ного раствора соляной кислоты), под лупой осторожно раздражают личинку препаровальной иглой. Наличие даже слабых движений указывает на то, что они живые. Личинок, извлеченных из органов и тканей рыб, освобождают от излишков ткани, кладут на стекло и окрашивают. На препарат наносят 2 капли 3%-ного раствора розоловой кислоты на 70%-ном спирте на 2 мин, добавляют каплю 0,1%-ного раствора едкого калия и еще оставляют на 2 мин. Излишек краски смывают физраствором, препарат высушивают полоской фильтровальной бумаги, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. Мышечная ткань и мертвые личинки окрашиваются в розовый цвет, живые личинки не окрашиваются.
Жизнеспособность личинок можно определить под микроскопом с подогревательным столиком при 36-37°С. Выделенных личинок переносят на столик, добавляют 2-3 капли желчи или 0,5%-ного раствора трипсина. Живые личинки через 5-10 мин выходят из цист. Можно также поместить личинку в каплю физраствора и под контролем микроскопа освободить ее от наружной оболочки с помощью препаровальной иглы. Наличие движений у личинки указывает на ее жизнеспособность.
Если трудно установить вид метацеркария, то личинку освобождают от оболочек механическим или химическим путем. Механически оболочку разрывают препаровальными иглами под контролем лупы. Химическим - измельченные кусочки поверхностных мышц рыб (0,3x0,5 см) в количестве 10-15 г помещают в искусственный желудочный сок в соотношении 1 : 10, ставят в термостат при 37-40°С на 2-3 ч, затем процеживают через марлю. Осадок переносят в чашку Петри, цисты вылавливают пипеткой при проходящем свете под лупой или под микроскопом или, добавив физраствор, круговыми движениями чашки отмывают цисты и они концентрируются в центре чашки. Раствор с края осторожно отсасывают резиновой грушей. Промывают до полного удаления остатков мышечной ткани. Для освобождения от внутренней оболочки цисты помещают в теплый 22-24°С раствор трипсина и поваренной соли (на 100 мл 1%-ного раствора NaCl берут 1 г трипсина). Метацеркарии трематод, освобожденные от оболочек, имеют характерные признаки, что служит критерием их видовой принадлежности.
В таблице 19 представлены морфологические признаки личинок трематод, паразитирующих у рыб. Для установления видовой принадлежности личинок, особенно из сем. Opisthorchidae, патогенных для человека и животных, нередко прибегают для постановки биопробы. Для этого подопытным животным (котятам, морским свинкам, хомякам) скармливают мясо рыб с метацеркариями трематод или мелкую рыбу. Содержат их в клетках. Вид личинки определяют через 3-4 недели путем обнаружения в фекалиях животных яиц трематод или половозрелых гельминтов в печени, желчном пузыре, кишечнике (в зависимости от вида гельминтов) при вскрытии подопытных животных.
Таблица 19. Диагностические признаки личинок трематод (метациркариев) рыб, опасных для человека и плотоядных животных
