ГЛАВА 8. БИОТЕХНИКА ИНКУБАЦИИ ИКРЫ ПЕЛЯДИ В ЗАВОДСКИХ УСЛОВИЯХ.

8.1. Биологический контроль при закладке икры на инкубацию

На базах и пунктах сбора икры перед началом рыбоводной кампании, затем в процессе получения оплодотворенной икры и ее размещения в инкубационные аппараты сигового рыбоводного завода проводят биологический контроль качества производителей (самцов и самок), уточняют количество икринок в 1 г и общее количество икры от разных групп самок, качество оплодотворения, процент нормально развивающихся икринок, биологическое качество спермы и т. д.

Состояние биологического качества однотипных размерно-возра-стных групп производителей и их продукции - развивающейся икры - фиксируют, записывают в рыбоводный журнал и оценивают по общепринятым методикам в рыбоводстве.

Качество икры, заложенной на инкубацию, вначале проверяют экспресс-методом, предложенным И.И. Мантельман (1976, 1978). Проба икринок в квличестве 100-150 шт., взятая из толщи (центра) инкубационного аппарата, помещается в 10% раствор формалина. Икринки с признаками разложения и недоброкачественности мутнеют в течение 1-2 минут, в то время как живые икринки остаются прозрачными. Оперативно подсчитывается число тех и других, после чего выполняется расчет количества нормально развивающихся яиц в данной партии икры. Этот показатель будет соответствовать «проценту оплодотворения».

Икру, размещенную в инкубационные аппараты в цехе рыбоводного завода, спустя 4-5 дней от момента искусственного осеменения икры, контролируют и определяют динамику её развития с помощью оптики - бинокуляров типа «Биолам» или МБС. Освещение -дневное. Свет наводят так, чтобы бластодиск получил белую окраску.

Контроль методом экспресс-анализа необходим для выявления истинной величины (в %) оплодотворенной (нормально развивающейся) икры, неразвивающейся и неправильно развивающейся.

Биологическому контролю подвергают равные количества (по 50 шт.) икринок на ранних стадиях дробления от 4 до 32 бластомеров, затем на стадиях обрастания бластодермой 1/3 и 1/2 желтка. Икру фиксируют смесью 96° спирта с ледяной уксусной кислотой в соотношении 3:1. Экспозиция фиксирования отдельно взятой икринки

длится 2-3 мин, а затем оперативный просмотр под оптикой. Икру на более поздних стадиях развития фиксируют формалином, разведенным физиологическим раствором (6,5 г поваренной соли на 1 дм3 воды). Для рассмотрения развивающейся икры на стадиях гаст-руляции необходим фиксатор с 7-10% формальдегида, а на стадиях органогенеза - 3-4%.

При рассмотрении в оптику выявляется следующее. Нормально развивающаяся икра: жировые капли средних размеров концентрируются у основания бластодиска в одной плоскости; зародышевый бугорок хорошо оформлен, он выпуклый. Форма икринки круглая, слегка овальная. Недозрелая и, следовательно, не оплодотворенная икра при набухании принимает неправильную яйцевидную или угловатую форму, разница между большим и малым диаметром достигает 25-35%. Перезревшая икра, использованная в рыбоводном процессе, при набухании обнаруживает одну крупную жировую каплю. Сильно перезревшая икра после процедуры осеменения так и не обводнялась, не набухает.

Начало и темп дробления бластодиска в ходе процесса образования 2-16 бластомеров зависит от температуры воды (табл. 26).

Таблица 26

Дробление зародыша икры пеляди при разной температуре

Градусы, С Время.в часах,от оплодотворения до появления борозд деления

первой второй третьей четвертой

0,4-0,8 22 30 40 51

2.0-3.0 18 25 33 42

3,5-4,0 16 20 25 34

На стадиях 4-32-х бластомеров можно различать (рис. 41):

- оплодотворенную нормально развивающуюся икру, у которой на выпуклом зародышевом бугорке видны насечки борозд дробления между бластомерами;

- неоплодотворенную икру - бластодиск выпуклый, хорошо оформлен, но по виду гомогенный без борозд дробления; с появляющимися позднее хаотичными волнами протоплазмы, завихрений. Смещения бластодиска на бок и т. д.;

-недозрелую икру - неправильной яйцевидной или угловатой формы, с растекающей по желтку протоплазмой;

- перезрелую - с 2-4 крупными жировыми каплями, прорывающими протоплазму зародышевого диска;

-поврежденную, погибающую - с разорванной оболочкой желтка, вытекающей в перивителлиновое пространство;

- мертвую - с коагулирующим побелевшим желтком.

стадии развития

I - нормально развивающаяся икра

II - аномальное развитие икры

набухание

плазменный бугорок

восемь бластомеров ложное дробление

среди: эрула

бластула

ложная морула

ложные бластомеры

Мертвые и погибающие икринки на стадии начала дробления свидетельствуют об их резорбции еще в теле самок либо получивших травмы при осмотрах, пересадках, а также грубых нарушениях биотехники искусственного осеменения икры и ее отмывке от клейкости. Неправильно развивающаяся икра обусловлена качеством самок и степенью зрелости их яйцеклеток. Наличие неоплодотворенных икринок указывает на нарушения биотехники получения и осеменения икры.

Для биологического анализа икры применяется способ бокового микроскопирования (Черняев, 1981), который позволяет подробно рассматривать структуру развивающегося яйца. Для рассмотрения живой икры сбоку используют микроскоп БИОЛАМ или аналогичную современную оптику (рис. 42).

обрастание желточного R

г „ ложное обрастание

мешка бластодермой

Рис. 41. Нормальное и аномальное развитие икры пеляди на стадиях дробления и гаструляции

Рис. 42 Общий вид микроскопа в рабочем положении: 1 - камера для игры;

2 - объектив микроскопа; 3 - подставка для удержания микроскопа; 4 - тубус с рисовальным аппаратом;

5 - рисовальный аппарат (по Ж.А. Черняеву, 1981)

Для микроскопирования икру помещают в камеру из органического стекла либо используется обычное предметное стекло. Икринки, обычно в количестве до 20 шт., вносят в камеру, заполняют водой и покрывают покровным стеклом (рис. 43), чтобы не осталось воздуха. За счет поверхностного натяжения покровное стекло плотно примыкает к корпусу камеры, а стекло основы камеры зажимают в клеммы предметного столика микроскопа для просмотра и анализа. Зародыши в оболочке икры, благодаря перивителлиновому пространству, поворачиваются анимальным полюсом вверх, а исследователь получает возможность рассматривать икру сбоку.

Рис. 43. Вертикальная камера для просмотра икры (вид сверху и сбоку):

1 - несущая пластинка (предметное стекло); 2 - пластинка-корпус камеры;

3 - покровное стекло; 4 - икринки в камере (по Ж.А. Черняеву, 1981)