7.4. Оптимизация процесса осеменения и оплодотворения икры.
При работе с производителями пеляди следует четко знать: с какой формой приходится работать рыбоводам? Принципиальное экологическое отличие речной пеляди от озерной состоит в том, что речная созревает в октябре перед ледоставом рек, то есть при температуре воды 3-4°С, хотя сам процесс нереста и, следовательно, вымета половых продуктов самками и самцами в естественных ус-92
ловиях протекает над песчано-галечным субстратом, где температура 2° и ниже.
Озерная же пелядь нерестует с середины ноября по декабрь включительно после установления прочного льда на озерах при температуре воды 0,2-0,8”С, омывающей донный нерестовый субстрат.
Зрелых (текучих) производителей, отловленных сачком, переносят в емкости с водой в рыбоводное помещение для искусственного осеменения икры, где их временно содержат в небольших чанах (бассейнах), желательно с проточной проаэрированной водой, имеющей
температуру 1” и ниже.
Получение половых продуктов пеляди и осеменение икры производят по общепринятой методике В.П. Врасского «сухим» способом отцеживания, то есть к «сухой» икре добавляется «сухая» сперма без наличия воды. Для отцеживания икры
используют эмалированные
Рис. 36. Крыло утки для перемешивания тазы Сперму отцеживают икры в тазу
отдельно в химически чистые стаканчики-бюксы. Все вместе перемешивается чистыми гусиными или утиными перьями (рис. 36). И лишь потом осторожно по стенке белого таза с эмалированным покрытием приливается вода, а икру вновь осторожно перемешивают.
В водной среде происходит процесс осеменения. Перед отцежи-ванием икры и спермы производителей предварительно обтирают сухим хлопчатобумажным (мягким) полотенцем, особенно вокруг генитального отверстия, затем, взяв самку и положив нижнюю часть ее тела на кромку таза, дают стечь первой порции икры самой, затем отцеживают остальную икру, легко массируя брюшко пеляди от головы к хвосту. Добиваться «полного» отцеживания не следует, потому что небольшая часть икринок, расположенная в этот момент у головной части яичника, еще «не созрела» и не готова для осеменения.
Нормально зрелая икра вытекает из гениталия ровной струей с небольшим количеством овариальной (полостной) жидкости. Икра пеляди чаще всего имеет оранжевую окраску. В анимальной части икринки располагаются небольшие жировые капли, в нижней вегетативной части основная масса представлена желтком.
Выполняя технологию отцеживания икры и спермы, следует массировать нижнюю брюшную часть тела между грудными, брюшными и анальным плавником (рис. 37), поскольку половые железы расположены в нижней половине брюшной полости.
Рис. 37. Чувствительность частей тела производителей пеляди при отцежива-нии половых продуктов: 1 - подлежащая легкому нажатию от грудных плавников к гениталию; 2 - не подлежащая силовому воздействию рук
Сдавливание производителей пеляди в зоне боковой линии и выше недопустимо, поскольку там расположены жизненно важные органы, легко подвергающиеся травматизации. Под позвоночником располагается почка, нйже - плавательный пузырь, печень, пищеварительный тракт. Над грудными плавниками - ближе к жаберной крышке - расположено сердце.
При отцеживании икры от самок следует внимательно следить за ее качеством на основе внешних признаков. Нельзя отцеживать для искусственного осеменения икру с признаками дегенерации (легко вытекающие мягкие, мутные с беловатым оттенком икринки, с примесями крови, а также сильным нажатием на брюшко). Эта икра затем все равно погибнет, поэтому лучше сразу таких самок выбраковывать, поскольку при смешивании некачественной икры со здоровой резко возрастет отход всей партии за счет наличия больных, разлагающихся и загнивающих икринок, представляющих благоприятный субстрат для питания паразитического грибка сапролегнии.
В один таз обычно отцеживают икру от 25-30 самок. Сперму отцеживают в стаканчики-бюксы примерно от такого же количества самцов, или на 20-30% меньше. Осеменение икры проводят сразу после ее отцеживания в таз. Однако при задержке с получением спермы от самцов, по каким-то причинам, для оплодотворения пригодна отцеженная икра и находящаяся в тазу при температуре воздуха 0,5°С в течение 3-4 часов. После такого срока резко возрастает количество икринок с аномалиями и непригодностью для процесса осеменения и последующего оплодотворения.
Спермии самцов пеляди в овариальной жидкости (отцеженной спермы в стаканчики-бюксы) сохраняют свою оплодотворяющую 94
способность до 50 мин., а при хранении в холодильнике продолжительность жизнеспособности спермы увеличивается.
Процедура осеменения протекает следующим образом. К порции икры, находящейся в тазу, приливают сперму из одного стаканчика и оперативно перемешивают птичьим пером, создавая равномерную «смесь» икры и спермы в овариальной жидкости продолжительностью 5-6 мин., затем приливают воду на 1/3 -1/4 объема таза, быстро, но легко перемешивают и на 3-4 мин оставляют в покое. Вода активирует движение спермиев, находящихся на поверхности яйцевой оболочки, и они проникают в микропилярные каналы икринок.
Общий процесс активного поступательного движения спермиев длится не более 2-2,5 мин, поэтому через 4-5 мин добавляют небольшими порциями свежую воду той же низкой температуры (ниже 0,8°С) и высоким содержанием кислорода (более 11 мг/дм3) и приступают к процессу отмывки ее от слизи, чешуек, спермы и для устранения клейкости. Для избавления от клейкости оплодотворенной икры пеляди ее промывают большим количеством воды с активной слабокислой реакцией pH 6,5-6,8. В начале процесса отмывки, прежде всего, избавляются от ненабухающих и недоразвитых икринок, которые вскоре побелеют (помутнеют), так как они не являются жизнеспособными. Они всплывают на поверхность воды.
Процесс оплодотворения (кариогамия) у пеляди происходит по типу моноспермии, поэтому через микропиле к ядру яйцеклетки приникает только один спермий. Одновременно оплодотворенное яйцо обводняется, в нем образуется перивителлиновое пространство (рис. 38) путем секреции содержимого кортикальных гранул и привлечения воды за счет осмоса из окружающей среды.
Puc. 38. Схема образования перивителлинового пространства: 1 - зрелое яйцо до начала кортикальной реакции; 2 - выделение содержимого кортикальных телец; 3 - содержимое кортикальных телец выделено и образовано перивителлиновое пространство (жг - желточные гранулы, ктп - кортикальные тельца; м - митохондрии; мв - микроворсинки; пп - перивителлиновое пространство; яо - яйцевая оболочка)
По этой причине увеличивается диаметр и объем икринок, что в практике рыбоводства именуется как «набухание» икры. В самой же икре (яйцеклетке) начинаются сложные биологические процессы развития.
Цитоплазма концентрируется в анимальной части икринки. Через 15-20 мин после осеменения у оплодотворенной икры повышается чувствительность к механическим воздействиям из-за ослабления прочности верхнего слоя цитоплазмы в процессе кортикальной реакции. Следовательно, после оперативной отмывки от клейкости оплодотворенную икру, проходящую процесс набухания, необходимо оберегать от механических движений: икру перьями не перемешивать, а лишь осторожно заполнять таз свежей водой необходимого качества (гидрокарбонатная, минерализация - 0,1-0,3 г/дм3, слабокислая активная реакция, низкая температура воды - не более 0,8-1,0°С с высоким содержанием кислорода - более 10 мг/дм3) и сливать ее. И лучше это осуществлять с помощью укрепленных шлангов небольшого диаметра.
По завершении процесса набухания, длящегося 8-10 часов, прочность оболочек икринок вновь повышается и развивающуюся икру пеляди можно транспортировать на рамках в изотермических ящиках в инкубационный цех, если он расположен далеко. Либо размещать сразу в инкубационные аппараты, когда весь рыбоводный биотехнический процесс происходит на территорий рыбоводного завода.
Для повышения жизнестойкости и рыбоводно-биологических показателей оплодотворенной икры пеляди применяют парааминобен-зойную кислоту (ПАБК). Это активное соединение не обладает мутагенной активностью и токсичностью. ПАБК способствует восстановлению первоначальной хромосомной структуры организма на основе механизма репарации, возрастает его сопротивляемость болезнетворным агентам, усиливаются функции специализированных систем на ферментативном уровне, повышается жизнеспособность организма в целом (Цой, Сергиенко, 1992; Князев и др., 1995).
Оплодотворенная икра в процессе ее набухания, обработанная ПАБК при разных концентрациях (методики ТюмГУ и СибрыбНИИ-проект), обладает повышенной жизнестойкостью, увеличивая выживаемость эмбрионов в среднем на 20%. Подращивание личинок пеляди, обработанных раствором ПАБК, способствует повышению выживаемости молоди и ускорению ее роста.
Парааминобензойная кислота представляет порошок, из которого готовят рабочий раствор за 1-2 часа до обработки икры либо личинок. ПАБК плохо растворяется в холодной воде, поэтому предварительно используют небольшой объем воды с температурой 80°С, тщательно перемешивают, затем добавляют холодную воду до необходимой концентрации: 0,1 или 0,5 г ПАБК на 10 л воды. Икру пеляди выдерживают в растворе ПАБК при концентрации активного вещества 0,001-0,005% в течение 2 часов. Личинок пеляди и других сиговых обрабатывают раствором ПАБК, содержащим действующего вещества на порядок меньше.
Высокую интенсивность формирования первичных половых клеток в процессе раннего эмбриогенеза пеляди, а также стойкость к экстремальным факторам среды озер карасевого типа (повышенный прогрев воды летом, дефицит кислорода) во время нагула товарных сеголетков можно стимулировать, используя рекомендации специалистов ТюмГУ (Селюков и др., 2000).
Технология заключается в обработке развивающейся икры и личинок двухсуточного возраста слабыми импульсными магнитными полями 120 кГц напряженностью 10-15 нТ с синусоидальной модуляцией 3-25 кГц аппаратуры фирмы «Телос».
В частности, при производственной апробации метода на Ара-кульском сиговом рыбоводном заводе, обработанная по этой технологии икра, а затем личинки пеляди, будучи, соответственно, вселенными в 1997 и 1998 гг. в оз. Байнауш Каслинского района Челябинской области, летом 1998 г. сеголетки и двухлетки пеляди выжили в условиях экстремально высоких температур воды +28"С и даже выше, а в октябре было отловлено 10,5 т товарной пеляди.
В соседних же аналогичных мелководных карасевых озерах Челябинской и Курганской областей культивируемая пелядь летом 1998 г. погибла от чрезмерного прогрева воды.
Коррекция с помощью аппаратуры «Телос» развивающихся эмбрионов и личинок пеляди стимулирует у обработанного рыбопосадочного материала тенденцию интенсивного развития и выживаемости при деструктивных проявлениях экологической обстановки в среде мелких и прогреваемых летом водоемах.
