1.2. Культивирование водорослей в XX веке

1.2.1. Обычное культивирование водорослей

В 1900 году Х.Зумстейн (H.Zumstein), студент Г.Клебса и В.Бенеке в Базеле, получил бактериологически чистую культуру Euglena gracilis Klebs. Он изолировал отдельные клетки с помощью капиллярной пипетки, а для устранения загрязняющих бактерий он сделал среду максимально ки- слой, но не губительной для водорослей. Исследования Р.Шодата (R. Cho- dat) (фото 1 c) и его коллег в Женеве были важны для расширения знаний о культивировании водорослей. Однако условия культивирования Р.Шодата часто очень сильно отличались от естественных, и он обнаружил появле- ние морфологических изменений в клетках. В течение более чем 30-летних исследований он выделил более 300 видов водорослей в чистые культуры (Chodat, 1928). В 1903 году О.Рихтер (O. Richter), родившийся в Праге ав- стрийский ботаник, продолжил работы П.Миквела по выращиванию аксе ничных культур диатомовых водорослей. О.Рихтер также расширил иссле- дования по изучению других водорослей, и в 1911 году он представил свою детальную публикацию, обобщившую все предыдущие работы по питанию водорослей (Richter, 1913). В 1903 году в Соединенных Штатах Г.Мур (Moore,1903) опубликовал резюме о культивировании водорослей. В этом же году в Великобритании Гариетт Чик (Chick, 1903) представила свою работу о Chlorella pyrenoidosa Chick. Она получила чистые аксенич- ные культуры, которые многократно проверяла и пришла к заключению, что водоросль предпочитает азот в виде солей аммония. В Германии Э.Кустер (Kuster, 1907) опубликовал пособие по культивированию водо- рослей. В 1908 году Кустер предпринял успешную попытку вырастить ди- нофлагелляты, хотя ему не удалось получить чистую культуру бесцветного морского вида, который он предварительно описал как Gymnodinium fuco- rum Kuster.

Х.Якобсен (Jacobsen, 1910), возможно, был первым, кто в 1910 году выделил бесцветную жгутиковую водоросль Polytoma uvella Ehrenberg. Он также был основоположником работ в выделении водорослей родов Carte- ria, Chlamydomonas, Chlorogonium и Spondylomorum (Chlorophyceae). Для органического обогащения он использовал различные сахара и пептон. Шарлотта Тернец (C.Ternetz) в 1912 году продолжила исследования Х.Зумстейна (H.Zumstein), начатые еще в 1900 году в Базеле, которые бы- ли посвящены изучению органического питания Euglena gracilis. Она об- наружила, что зеленые формы этих организмов становятся бесцветными при выращивании в темноте, но снова приобретают зеленую окраску на свету. С другой стороны, при этом существовали постоянно бесцветные, но менее жизнеспособные формы Euglena gracilis (Preisig, Andersen, 2005).

В 1910 году Э.Аллен (E.Allen, 1910) (фото 1.d), директор Морской Биологической Ассоциации Соединенного Королевства, и его коллега Э.Нельсон (D.Nelson) внесли существенный вклад в развитие культивиро- вания водорослей, включая самые ранние попытки выращивать водоросли в качестве корма для морских животных. Они выделяли и выращивали Chaetoceros, Skeletonema и Thallassiosira для питания морских беспозво- ночных. Э.Аллен и Э.Нельсон создали искусственную морскую воду, ис- пользуя различные концентрации солей. Кроме того, они установили важ- ность железа как микроэлемента. Однако они добились хорошего роста водорослей только путем добавления небольшого количества естественной морской воды (менее 1-4%) к искусственно созданной. Э.Аллен в 1914 го- ду отмечал (Allen, 1914), что этот эффект может быть следствием воздей- ствия продуктов метаболизма бактерий и предположил, что органические микронутриенты так же важны, как и витамины, которые были только что открыты Казимиром Функом (Preisig, Andersen, 2005).

Так как Э.Аллен и Э.Нельсон выращивали массовые культуры во- дорослей не только в пробирках и колбах, они столкнулись с новыми  проблемами. Они быстро осознали, что в больших сосудах для культи- вирования лимитирующим фактором является свет, и до сих пор лими- тирующее действие света продолжает оставаться главной проблемой в массовом культивировании водорослей. В связи с потребностями в большом объеме культур, они перестали использовать искусственную морскую воду и впоследствии стали использовать только обогащенную естественную морскую воду. Они установили, что вода в гавани («ре- зервуарная вода») была загрязнена, а морская вода из Английского Ка- нала («внешняя вода») была намного чище. Для очистки больших объ- емов морской воды, они кипятили е? с последующим очищением дре- весным углем и пероксидом водорода. Исследователи даже пытались озонировать морскую воду, сообщая о небольшом успехе с использова- нием «несовершенного аппарата». Они предположили, что «промывка» раствора, проводимая П.Миквелом, могла бы быть «защитной» проце- дурой, при которой смывались или обезвреживались опасные субстан- ции (например, токсины). Подобное происходило при использовании древесного угля (содержащего большое количество кальция и фосфата магния) и пероксида водорода, которые оказывали подобный защитный эффект. Э.Аллен и Э.Нельсон установили, что нитрат калия был перво- степенно важным «питательным» ингредиентом в растворе Миквелла и обнаружили, что в некоторых случаях требовалось добавление фосфата.

Эти выдающиеся исследователи выращивали много диатомовых водорослей на «Морской воде Миквелла». Эта среда также поддерживала рост нескольких видов неустановленных видов красных водорослей, циа- нобактерий, зеленых водорослей (например, Enteromorpha), Vaucheria (Xanthophyceae), и даже молодых растений Laminaria (Phaeophyceae). Эти наблюдения подвели Г.Дрю (Drew, 1910) к проведению экспериментов по искусственному культивированию Laminaria digitata (Hudson) Lamouroux и к открытию ранних стадий их жизненного цикла. Таким образом, Э.Аллена можно считать основоположником марикультуры водорослей, впервые ис- пользовавшим водоросли для корма морских животных и заложившим ос- новы культивирования водорослей.

Хотя Г.Дрю (Drew,1910) смог культивировать Laminaria, он не обра- тил внимания на то, что водоросль имеет микроскопический гаметофит, и что макроскопическое растение является спорофитом. Первое открытие гетероморфного жизненного цикла у бурых водорослей было сделано не- сколькими годами позже C.Саважем (Sauvageau, 1915) во Франции, кото- рый культивировал Sacchorhiza bulbosa J.Agardh (другой вид порядка La- minariales). Это очень важное открытие C.Саважа привело к повышенному вниманию многих исследователей к проблеме культивирования бурых во- дорослей. Стало очевидным, что циклы развития многих водорослей этой группы невозможно установить без лабораторного культивирования.

В 1912 году Э.Прингшейм (E.Pringsheim) (фото1e), в то время рабо- тавший в Халле ан дер Саале (Германия), опубликовал первую часть своей монографии о методах культивирования водорослей (после многочислен- ных дополнений в течение долгого периода времени вплоть до 1970 года, его книга «Чистые культуры водорослей» 1946 года (Pringsheim, 1946) и ее перевод на немецкий в 1954 году были очень популярны). В работе 1912 года Э.Прингшейм (Pringsheim, 1912) показал, что хлор в водопроводной воде вреден для выращивания пресноводных водорослей. Вместо водопро- водной или ключевой воды он использовал дистиллированную воду, полу- ченную с помощью стеклянного дистиллятора. Было доказано, что дистил- лированная вода, полученная с помощью металлического аппарата, явля- ется практически непригодной. Э.Прингшейм также усовершенствовал ме- тодику изоляции отдельных клеток или нитей с помощью капиллярной пи- петки для уменьшения бактериального загрязнения. В этом же году он на- чал использовать почвенную вытяжку и позднее торф как добавки в очи- щенные минеральные среды для улучшения роста. С тех пор эти методики стали широко использоваться при культивировании водорослей.

Двухфазные культуры с пастеризованной почвой, покрытой водой, не только могли поддерживать лучший рост инокулированного материала, но также позволяли выращивать в культуре формы, не растущие на обыч- ных средах. Установление того факта, что включение источников органи- ческого углерода в среды для культивирования способствует развитию бесцветных форм водорослей, привело к исследованиям гетеротрофии во- дорослей.

Согласно сведениям Р.Хардера (Harder, 1917), Э.Прингшейм был первым, кто смог получить аксеничные культуры цианобактерий. В 1921 году Э.Прингшейм установил, что ацетат является превосходным субстратом для гетеротрофного роста бактерий. Он показал, что раз- личные виды Volvocales, Euglenophyceae, Cryptophyceae и диатомовые водоросли могут расти в темноте на ацетате, но не на глюкозе. С года- ми Э.Прингшейм создал большую коллекцию культур водорослей, сна- чала в Халле ан дер Саале, позднее в Германском Университете в Пра- ге, которая к 1928 году включала почти 50 видов (к 1929 году более 100 видов). Позднее коллекция была перемещена в Кембридж и положила начало знаменитому Центру Культивирования Водорослей и Протозоа (CCAP). В 1953 году Э.Прингшейм покинул Кембридж и вновь уехал в Германию. Из взятых с собой субкультур он основал другую большую коллекцию водорослей - Коллекцию Культур Водорослей Геттингена (SAG). В целом, Э.Прингшейму удалось выделить приблизительно 2000 культур, представляющих 400 видов водорослей.

Отто Варбург (Warburg, 1919) (фото1f), прославленный физиолог и биохимик, живший в Берлине, установил, что быстрорастущие зеле- ные водоросли, такие, как Chlorella, являются идеальными эксперимен тальными объектами в биохимических и физиологических исследова- ниях и использовал эти культуры в своих работах по изучению процес- са фотосинтеза. Он обогащал жидкие питательные среды воздухом, на- сыщенным диоксидом углерода, и применял искусственные источники света, состоящие из лампы в 300Вт в стеклянном стакане с холодной водой, который служил экраном, абсорбирующим инфракрасное излу- чение.

Похожий искусственный источник света был описан М.Хартманом (M.Hartmann). Подобные лампы он использовал в своих успешных экспериментах по культивированию вольвоксовых водорос- лей (например, Eudorina, Gonium), которые ранее рассматривались как наиболее трудно культивируемые (Hartmann, 1924). Первыми исследо- вателями, получившими чистые культуры Volvox, были русские ученые Е.Успенский и В.Успенская (Uspenski, Uspenskaja, 1925). Они исполь- зовали среду, содержащую смесь минеральных солей, включая железо, с добавлением цитрата для предотвращения его осаждения. Позже в Берлине Ф. Веттштейн (F.Wettstein) смог получить одновидовые, но не аксеничные культуры нескольких групп флагеллят, не культивируемых ранее (Cryptomonas, Synura, Uroglena), выращивая их на агаре, содер- жащем экстракт торфа.

Андрей Львов (A.Lwoff) (фото 2 а), работавший в Институте Пас- тера в Париже, был современником Прингшейма. А.Львов больше ин- тересовался протозоа, грибами, бактериями и вирусами, однако он сде- лал несколько дополнений в знания о росте водорослей с использова- нием органических соединений, особенно аминокислот. Свои идеи он опубликовал в целом ряде сводок о методике культивирования микро- организмов (Lwoff, 1923, 1929, 1932). Изучение потребностей некото- рых водорослей в специфических органических соединениях послужи- ли толчком для исследований М.Друпа (M.Droop) и открытия убихино- на для роста динофлагелляты Oxyrrhis marina Dujardin (Drop, Doyle, 1966).

Э.Шрайбер (Schreiber, 1927), который работал в Варбурге и Бер- лине, разработал специальную комбинацию питательных веществ для культивирования вольвоксовых пресноводных водорослей и для мор- ского фитопланктона. Его знаменитая среда, состоящая из смеси нитра- та и фосфата, была основана на минимуме потребностей в двух элемен- тах, необходимых для культур диатомовых водорослей. Д.Хаммерлинг (J.Hammerling), студент М.Хартмана, расширил эти исследования пу- тем добавления почвенной вытяжки в среду Шрайбера для выращива- ния зеленой водоросли Acetabularia. Эта «почвенная среда Шрайбера» в течение многих лет успешно использовалась для выращивания как одноклеточных, так и бентосных морских водорослей, которые не мог- ли расти на других средах (Foyn, 1934).

 

Фото 2: a - Андрей Львов (Andre Lwoff) (1902-1994); b - Ульям Ви- шер (Whilhelm Vischer) (1890-1960); c - Харольд Чальз Болд (Harold Charles Bold) (1909-1987); d - Луиджи Провасоли (Luigi Provasoli) (1908-1992); e - Ричард Катрон Старр (Richard Cawthron Starr) (1924-1998); f - Хироши Та- мия (Hiroshi Tamiya) (1903-1984) (Preisig, Anderson,2005).

Ф.Майнкс (F.Mainx), сотрудник Э.Прингшейма в Германском Уни- верситете в Праге, также внес большой вклад в знания о культивировании водорослей. Он предложил метод центрифугирования для изоляции водо- рослей и был одним из первых исследователей, использовавших фототак- сис подвижных стадий для получения чистых культур. С.Скиннер в Уни- верситете Миннесоты модифицировал метод Бристоль-Роач в новую мето- дику выделения водорослей с использованием агара, основанную на мето- де разведения (Skinner, 1932). Он готовил серию из нескольких питатель- ных агаровых тест-пробирок, которые затем охлаждались до застывания агара. В первую пробирку он вносил несколько капель суспензии почвы и воды и многократно встряхивал пробирку. Затем он помещал небольшое количество суспензии из первой пробирки и помещал во вторую. Этот процесс повторялся более 10 раз. После инкубации он разбивал стеклян- ную тест-пробирку и помещал цилиндрический кусочек агара на стериль ную бумагу. С.Скинер многократно ломал (не резал!) агар и с помощью маленькой лупы и препаровальной иглы снимал небольшие колонии водо- рослей, растущие на поверхности агара. Колонии, представляющие собой потомство отдельных клеток, вносились в жидкую среду, выращивались и потом снова помещались на застывший агар. После второй серии разруше- ния тест-пробирки и выделения колоний из одиночных клеток он устано- вил, что приблизительно половина колоний водорослей были аксеничны- ми.

У.Вишер (фото 2b), ранее работавший с Р.Шодати, был выдаю- щимся специалистом в области культивирования наземных водорослей, особенно групп Chlorophyceae и Heterocontae (Xanthophy- ceae/Eustigmatophyceae) (Vischer, 1926, 1937, 1960). В 1975 году его большая коллекция культур в Университете Базеля (Швейцария), вклю- чающая многие типовые штаммы, была перенесена в коллекцию культур ASIB в Инсбруке (Австрия), где она остается до сих пор и составляет бoльшую часть настоящей коллекции (Gartner, 2004).

Трое из самых видных фикологов последнего века – Гейтлер в Вене (Австрия), Корнманн в Хелголанде (Германия) и вон Стош в Магдебурге (Германия) – при исследовании культур водорослей основной акцент уде- ляли жизненным циклам и систематике. Их наиболее активная научная карьера началась в 1920-х (Гейтлер) и в 1930-х годах (Корнманн и вон Стош) и продолжалась до 1980-х годов (Garbary, Wynne, 1996).

В Соединенных Штатах Харольд Болд (фото 2c) разработал соб- ственные методы культивирования (Bold, 1936, 1942, 1974) и внес не- оценимый вклад в изучение микроскопических водорослей. Его знаме- нитый обзор «Культивирование водорослей» (1942) стал новым словом в фикологии.

С.Чу (S.Chu), который прибыл в Великобританию из Китая в 1938 году и сначала работал вместе с Фричем в Лондоне и позднее в Милпорте и Плимуте (в 1945 году он уехал в Америку и потом вернулся обратно в Китай), также был пионером среди тех, кто изобретал питательные среды, имеющие сходство с субстратами, на которых растут водоросли в естест- венных условиях. Его очень успешная среда Чу-10 была сходна по составу солей и концентрации с водой из эвтрофных озер (Chu, 1942).

Л.Провасоли (фото 2d), сначала в Италии (Provasoli, 1937/38), позд- нее в Соединенных Штатах, вместе с С.Хатнером, И.Пинтнером и другими коллегами (Hutner et al., 1950; Provasoli, Pintner, 1953) занимался пробле- мой создания искусственных сред для культивирования водорослей в те- чение более чем 40 лет (в 1930-80-х годах). Он и его коллеги были одними из первых исследователей, использовавших антибиотики для получения бактериологически чистых культур (Provasoli et al., 1948). Хотя потреб- ность в витаминах была известна ранее, они провели всесторонние иссле- дования для определения потребности в витаминах для большого числа  водорослей (Provasoli, 1958б). Включение витаминов и органических экс- трактов в морские среды значительно увеличивало количество водорослей, выращиваемых аксенично. Другим нововведением, которое сделало среду Провасоли такой успешной, было добавление ЭДТА (этилендиаминтетра- уксусной кислоты), метаболически инертного хелатора, заменяющего ор- ганические хелаторы, такие как цитрат (Hutner et al., 1950). ЭДТА позволя- ла обогащенным искусственным средам и морской воде дольше сохранять свойства среды, по сравнению со средами с добавлением почвенного экс- тракта (Provasoli et al., 1954; Provasoli et al., 1957; Provasoli, 1958б).

Необходимость добавления микроэлементов была кратко обобщена Л.Провасоли и И.Пинтнером (Provasoli, Pintner, 1960), которые объяснили, почему сначала в среду было необходимо добавлять только железо, а по- том – кобальт, медь, марганец, молибден, ванадий и цинк. Они отмечали, что в результате промышленных методов очистки «химически чистые» со- ли подвергаются многим изменениям, что приводит к появлению постоян- но изменяющихся примесей. Другим новшеством Л.Провасоли было ис- пользование физиологически инертного рН буфера и применение глице- рофосфата натрия в качестве растворимого источника фосфора, что пре- дотвращало осаждение железа. Л.Провасоли был первым, кто смог полу- чить аксеническую культуру зеленой ветвящейся водоросли Ulva. Он об- наружил, что в культуре при отсутствии бактерий для нормального разви- тия тела водоросли необходимы растительные гормоны (Provasoli, 1958a). Наследие Провасоли существует в виде его большой коллекции морских водорослей, которые были присоединены к коллекции Роберта Джулиарда и сейчас существуют в составе Национального Центра Культивирования Морского Фитопланктона Провасоли-Джулиарда (CCMP) в Лаборатории Океанических наук Бигелоу в Мейне.

Открытие пенициллина, стрептомицина и других антибиотиков при- вело к их широкому использованию против бактерий в культурах водорос- лей. Л.Провасоли с соавторами (Provasoli et al., 1948), работая над получе- нием аксеничных штаммов с применением антибиотиков, обнаружили, что стрептомицин может использоваться для получения бесцветных мутантов Euglena. Ранние сообщения о получении аксеничных культур с использо- ванием антибиотиков включают данные М.Голдзвейг-Шелубски (M.Goldzweig-Shelubsky), который получил бактериологически чистые культуры Scenedesmus, Navicula, Euglena в результате обработки пеницил- лином; С.Спенсера (S.Spencer), который смог очистить Phaeodactylum; К.Рейча (K.Reich) и Д.Кана (J.Kahn) о получении аксеничной культуры Prymnesium parvum Carter; М.Друпа (M.Droop) о разработке метода для очистки водорослей с применением антибиотиков (Preisig, Andersen, 2005). Р.Старр (R.Starr) (фото 2 e), студент Х.Болда, в 1953 году начал соз- давать коллекцию культур в Университете Индианы, которую в 1976 году перевез в Техасский Университет в Остине (Коллекция культур водорос лей UTEX) (Starr, Zeikus, 1993). Сначала она содержала преимущественно штаммы зеленых водорослей (особенно Volvocales, Chlorococcales, Desmi- diales), которые он использовал для своих исследований, а также 200 штаммов, которые он получил от Э.Прингшейма. Эта коллекция затем бы- ла значительно расширена (в 1976 году она насчитывала 2000 штаммов), и сейчас она состоит примерно из 2300 штаммов (относящихся приблизи- тельно к 200 различных родам), представляющих одно из крупнейших и разнообразных собраний живых водорослей на Земле.

1.2.2. Массовое культивирование микроводорослей

Кроме достижений Э.Аллена и Э.Нельсона (Allen, Nelson, 1910), ко- торые выращивали водоросли для сельского хозяйства, ученые развивали новые методы массового производства водорослей для других целей. Пер- вые работы по выращиванию микроводорослей (особенно Chlorella) на твердых культурах проводились О.Варбургом (O.Warburg) в Берлине. В Институте Океанографии Вудс Хоул (Woods Hole Oceanographic Institution) в США Б.Кетчум (B.Ketchum) и А.Редфилд (A.Redfield) описали методику поддерживания непрерывных культур морских диатомовых водорослей в больших объемах для химических анализов. Процедура включает перио- дический сбор урожая из установленной части (на килограмм или более сухого материала) в критический момент кривой роста, пока оставшаяся популяция продолжает размножаться и расти до сбора нового урожая. С помощью этой методики Б.Кетчум также добился роста и оптимального урожая клеток и других одноклеточных водорослей. Этот полунепрерыв- ный метод культивирования до сих пор используется в сельском хозяйстве как средство быстрой продукции фитопланктона для корма морских жи- вотных. В Геттингеме (Германия) Р.Хардер (R.Harder) и Х.Уич (H.Witsch) также начали эксперименты по массовому культивированию диатомовых для определения возможности получения жиров из этих культур (Preisig, Andersen, 2005).

Большой аппарат для выращивания Chlorella в непрерывных культу- рах был создан Д.Майерсом (J.Myers) и Л.Кларком (L.Clark) в Техасском Университете в Остине. Они изобрели его для поддержания своих культур в определенной точке кривой роста путем разбавления раствора, контро- лируемого фотометрической системой. В оригинале эта установка пред- ставляла собой вертикальную камеру в форме рукава, освещенную верти- кальной трубчатой лампой таким образом, чтобы эффективное освещение не зависело от общего объема раствора. Клетки собирались вручную через определенные интервалы, при этом оставляли небольшой объем раствора для инокулята.

Микроводоросли, такие как Chlorella, рассматривались как потенци- альные объекты для коммерческого использования (например, для получе ния продовольствия) Х.Споером (H.Spoehr) и Х.Милнером (H.Milner) из Института Карнеги Стенфордского Университета в Калифорнии. Даль- нейшие исследования по применению лабораторных методов для непре- рывного промышленного культивирования хлореллы проводились П.Куком (P.Cook) в Стенфордском Исследовательском Институте, кото- рый построил небольшой пилотный (экспериментальный) завод. Заинтере- сованность в продолжении массового культивирования водорослей про- явил Институт Карнеги через контракт с Артуром Д.Литтлом и компанией из Кембриджа (Массачусетс), который создал и запустил несколько заво- дов, расположенных на крыше промышленного здания (Burlew, 1953). Краткосрочные урожаи хлореллы составляли 11г сухого веса?м-2?день-1. Было сделано заключение, что урожая до 20-25г сухого веса?м-2?день-1 можно достичь только за счет улучшения технологии и культивирования в более подходящих географических условиях.

В конце 1940-х и в начале 1950-х годов важные работы по про- мышленному производству хлореллы проводились в Германии Х.Витшем (H.Witsch). Ф.Гуммерт с коллегами (F.Gummert) начал ис- следовательскую программу по крупномасштабному производству в оранжереях и на открытом воздухе в Эссене.

Примерно в это же время другая серия лабораторий и пилотных заводов по выращиванию хлореллы была запущена в Японии под руко- водством Х.Тамия (H.Tamiya) (фото2f) в Институте Токугайа в Токио. Эта же группа ученых добилась успехов в интродукции методики син- хронизации культур. Синхронизация, экспериментально достигнутая координация индивидуальных жизненных циклов в популяции клеток, была большим прогрессом для экспериментальной работы в физиоло- гии водорослей и впоследствии использовалась для модификации дру- гих методик (Tamiya, 1966).

Результаты первого всплеска массового культивирования микро- водорослей были опубликованы в сводке под редакцией Дж.Бурлеу (Burlew, 1953). Более поздние данные о культивировании микроводо- рослей представлены в работе К.Соедера (Soeder, 1986).

1.2.3. Культивирование морских водорослей

Вплоть до 1950-х годов почти все морские водоросли, используемые в промышленных отраслях, собирались только из естественных местооби- таний. Porphyra (красная водоросль), известная как «нории» в Японии, «зицаи» в Китае и «лавер» на западе, является единственной водорослью, имеющей долгую историю культивирования. Это наиболее часто употреб- ляемая в пищу макроводоросль, произрастающая в прибрежных к юго- восточной Азии районах Тихого океана, первые упоминания о ее культи- вирование относятся к XVII веку (Preisig, Andersen, 2005). Повышение  природных запасов первоначально достигалось путем помещения ветвей деревьев или безлистных побегов бамбука на дно моря или очищением по- верхности скал, которые служили местом для прикрепления этих водорос- лей. С конца 1920-х годов сети с крупными ячейками (сначала изготавли- ваемые из волокон кокоса, но потом замененные на сети из других мате- риалов) натягивали горизонтально между рядами бамбука. Эти сети можно было легко перенести с поверхности земли на место культивирования, позже этот способ стал основным в производстве нори в Японии. В 1949 году британский ботаник Кетлин М.Дрю исследовала полный жизненный цикл порфиры, в частности и микроскопические стадии, что привело к пе- ресмотру методик культивирования и инициировало быстрое развитие производства порфиры с 1960-х годов (Garbary, Wynne, 1996). Дальнейшее развитие способов культивирования порфиры и других морских водорос- лей было подробно описано С.Ценгом (Tseng, 1981).

1.2.4. Криопрезервация

Криобиология получила толчок для своего развития только в 1949 году, когда было обнаружено, что глицерин предохраняет сперматозоиды домашней птицы от повреждения при замораживании (Polge et al., 1949). Со времен этого открытия сохранение в жидком азоте стало стандартной методикой для длительного хранения водорослей, однако первые полные сводки о замораживании клеток водорослей были опубликованы только в начале 1960-х годов (Terumoto, 1961; Holm-Hansen, 1963).

Контрольные вопросы 1. Кто стоял у истоков культивирования водорослей? 2. Какой вклад в изучение водорослей внес М.Бейеринк? 3. Какие методы культивирования водорослей использовали в XIX веке? 4. Какой вклад в фикологию внесли П.Миквелл и Г.Клебс? 5. Чем характеризовалось культивирование водорослей в XX веке? 6. Какова роль Э.Прингшейма в создание коллекций водорослей? 7. Какой вклад в развитие культивирования водорослей внесли Х.Болд и его ученики? 8. Кто из наших соотечественников внес большой вклад в развитие фикологии? 9. Укажите способы массового культивирования морских водорослей. 10. Какова роль криопрезервации в современной фикологии?